Фотометрический метод определения витамина с

Каждый человек остро нуждается в витаминах, и потребность в них чрезвычайно важна в нашей повседневной жизни. Недостаток витаминов в организме человека вызывает в начале заболевания средней интенсивности (гиповитаминозы), а при длительном недостатке – тяжелые заболевания (авитаминозы). В зависимости от того, какого именно витамина недоставало в пище, возникают различные заболевания [4]. Среди них важную роль играет аскорбиновая кислота, которая участвует в окислительно-восстановительных процессах в человеческом организме, способствует повышению его сопротивляемости заболеваниям. Она входит в состав многих фруктов, овощей и других продуктов питания как природный компонент, ее часто добавляют также в продукты питания как антиоксидант. Поэтому определение аскорбиновой кислоты – одна из важных задач анализа, что подтверждается многочисленными публикациями о методиках ее определения в различных продуктах питания и синтетических фармацевтических препаратах [3].

Аскорбиновая кислота (витамин С) представляет собой γ-лактон 2,3-дегидро-L(+)-гулоновой кислоты. Весьма характерны для аскорбиновой кислоты реакции восстановления метиленовой сини и 2,6-дихлорфенолиндофенола, окисляясь при этом в дегидроаскорбиновую кислоту. Аскорбиновая кислота при окислении теряет 2 атома водорода, следовательно, в окислительно-восстановительных реакциях ведет себя как двухосновная кислота [2].

Целью данной работы является разработка спектрофотометрического метода определения аскорбиновой кислоты на основе реакции восстановления 2,6- дихлорфенолиндофенола и его определение в лекарственных препаратах.

2,6-дихлорфенолиндофенол (ДХФИФ) – удобный и хорошо изученный аналитический реагент для фотометрического и титриметрического определения восстановителей. Перспективность использования ДХФИФ для разработки спектрофотометрической методики основана на высокой контрастности изменения окраски при восстановлении ДХФИФ [1].

В работе использовали стандартный раствор (0,1 мг/мл) аскорбиновой кислоты и 3,5∙10-3 М раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола в виде натриевой соли, полученные растворением точных навесок в бидистиллированной воде.

Кислотность растворов измеряли с помощью рН-метра «ЭСК-10301/7». Оптическую плотность окра­шенных растворов измеряли на спектрофотометрах LEKI SS1207, спектры регистрировали на Specord-210 PLUS (Analytic Jena, Германия).

Для построения градуировочного графика в колбы емкостью 25 мл вводили по 2 мл раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола и растворы аскорбиновой кислоты с увеличивающейся от опыта к опыту концентрацией. Создавали в растворах значение рН 6, разбавляли водой до метки и измеряли оптическую плотность растворов.

Объектами анализа служили таблетки «Аскорутин» и драже «Аскорбиновая кислота». Предварительно определив среднюю массу таблеток и драже, навески растертых их порошков переносили в колбу емкостью 100 мл и растворяли в небольшом количестве дистиллированной воды. После полного растворения навески доводили до метки водой и для отделения малорастворимых включений раствор фильтровали через сухой фильтр.

2,6-дихлорфенолиндофенол является хорошо изученным окислительно-восстановительным индикатором. Восстановленная его форма бесцветна, а окисленная форма – кислотно-основной индикатор, окрашенный в красно-розовый цвет (λmax = 520 нм) в кислом растворе и в синий цвет (λmax = 600 нм) в щелочном растворе [1]. На рис. 1 приведены спектры поглощения растворов ДХФИФ в кислой (1), нейтральной (2) и щелочной (3) средах.

Рисунок 1. Спектры поглощения 2,6-дихлорфенолиндофенола (6×10-5 М) при значениях рН: 1 – 3,2; 2 – 7,1; 3 – 9,6

Важным фактором, влияющим на ионное равновесие, является кислотность раствора. Как видно из рис. 1, кислотность среды влияет на светопоглощение ДХФИФ. Максимум светопоглощения ДХФИФ наблюдается при длине волны 520 нм для кислых растворов (кривая 1). При рН > 6 в спектре поглощения ДХФИФ наблюдаются батохромное смещение максимумов светопоглощения. При этом синяя окраска реагента устойчивее и интенсивнее красной (рис. 2), следовательно, лучше будет наблюдаться контрастность изменения синей окраски при восста­новлении аскорбиновой кислотой. Аскорбиновая кислота не активна в щелочной среде. Оптимальным для осуществления реакции восстановления ДХФИФ является рН 6 – 7, так как при рН < 6, реагент менее устойчив, а при рН > 7, происходит окисление аскорбиновой кислоты.

Рисунок 2. Зависимость оптической плотности раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола от рН (СДХФИФ = 6×10-5 М, λ = 600 нм)

Изучено взаимодействие аскорбиновой кислоты с 2,6-дихлорфенолиндофенолом при рН 6. После контакта с раствором аскорбиновой кислоты интенсивность окраски реагента уменьшается. Обесцвечивание сопровождается снижением светопоглощения пропорционально содержанию аскорбиновой кислоты в растворе (рис. 3).

Рисунок 3. Спектры поглощения 2,6-дихлорфенолиндофенола после контакта с раствором аскорбиновой кислоты, СAsc, мг/л: 1 – 0; 2 – 0,4; 3 – 0,8

На рис. 4 представлена зависимость уменьшения поглощения при 600 нм от концентрации аскорбиновой кислоты в растворе при рН 6. Уравнение градуировочной зависимости имеет вид: y = -0,1812x + 0,140.

Рисунок 4. Градуировочный график А = f (САск) для определения концентрации аскорбиновой кислоты спектрофотометрическим методом (λ = 600 нм)

Диапазон линейности градуировочного графика составляет 0,06 – 0,84 мг/л. Разработана методика спектрофотометрического определения аскор­биновой кислоты с достаточной точностью (R2 = 0,9983) и чувствительностью. Данная методика апробирована при анализе таблеток «Аскорутин» и драже «Аскорбиновая кислота» (табл.)

ГОСТ 24556-89

Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения витамина C

GOST 24556-89 Products of fruits and vegetables processing. Methods for determination of vitamin C